jembio DNA連接酶說明書

DNA連接酶（大腸桿菌）

DNA 連接酶（大腸桿菌）催化雙鏈 DNA 中并列的 5' 磷酸和 3' 羥基粘性末端之間形成磷酸二酯鍵。

描述：

• 催化具有粘性末端的雙鏈 DNA 片段之間形成磷酸二酯鍵。

• 5'-磷酰基與相鄰的 3'-羥基的縮合伴隨著 NAD+ 的水解。

• 適用于全長cDNA（1、2）的高效克隆。

單位定義：一個(gè)單位定義為產(chǎn)生 50% 的 λ DNA 的 Hind III 片段連接所需的酶量。

在 20 µl DNA 末端濃度為 0.02 µM (50 µg/ml) 的測定混合物中在 16oC 下孵育。

儲存條件：儲存于-20oC。

反應(yīng)緩沖液：30 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 8.0）、1 mM 二硫蘇糖醇、4 mM MgCl2、26 µM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白。

最佳連接發(fā)生在 16°C。

儲存緩沖液：10 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 7.4）、50 mM KCl、0.1 mM EDTA、10 mM 硫酸銨、1 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油。

質(zhì)量控制：所有制備物都經(jīng)過了內(nèi)切核酸酶和外切酶活性的污染測試，以及連接反應(yīng)中的功能測試。

連接分析條件：30 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 8.0）、4 mM MgCl2、1.2 mM EDTA、1 mM 二硫蘇糖醇、0.026 mM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白和 λ DNA 的 Hind III 片段。在 16°C 下孵育 30 分鐘。